将以下组分按产品说明文档中描述步骤进行混合，并离心5秒，使管壁上残留的液体流入离心管部：

• 优化型反应预混液（Reaction mix）❷

• 模板DNA ❹

• 大肠杆菌提取液（E. coli cell extract）❶

或

    优化型大肠杆菌提取液（Modified E. coli cell extract） ❶

• 稀释用缓冲液（Dilution buffer）❺

*上述步骤请于冰上操作。

*若非大量质粒提取物，请先进行Z-PCR步骤，详见产品说明文档。

按照产品说明书中指示，加透析外液（Outer mix）❸至指定量于试剂盒自带外液管中。

• 转移反应内液至提供的透析袋内，并盖上盖子

• 将该透析袋置于盛有反应外液的外液管并旋上盖子

• 置于30°C（静置或低速震荡）中过夜

• 将透析袋内的反应液转移至灭菌离心管内，并离心（≥ 14 000 g，4°C，
10分钟）

• 将上清液转移至灭菌离心管内。用户可选择直接用其进行下游分析，或低温保存

*可取3–5 uL反应样品，并用SDS-PAGE凝胶电泳检查目标蛋白是否表达